metoda stosowana do znaleziena w drobnoustroju konkretnego genu np. genu oporności na metycykline mecA1 charakterystyczny dla MRSA S aureus. Czyli pozwala na identyfikacje adnego drobnoustroju znając jedynie fragment harakterystyczny. Po izlacji DNA szczepu badanegu uzyto go jako matrycy a jako primer jednoniciowy fragment dna homologiczny do genu meca.Uzywamy 2 primerów Program: 1. denaturacja wstępna 94C 94s 2.25 cykli: denaturacja 94-30s, przyłączen primer 48.5C-60s, synteza nici DNA 72C 60s Produkty elektroforezie w zelu i barwić bromiem etydyny, analiz w UV. Szczepy MRSA mają prązek 600 par zasad. RAPD- analiza polimorfizmu losowo namnoz DNA. Szybka rozruznia szczepy w obrębie gatunku. Stosujemy tylko 1 primer krótki 10par zasad, nie musimyznać sekwencji DNA drobnoustroju. Sam znajdzie komplementarne odcinki. Stosujemy niską temp przyłacze primera. Skuteczna amplifikacja nastepuje gdy dwie cząstki zwiąą się w odległości 200-200o par i kazda z inną nicią. Reakcja PC dwu fazowa 5 cykli z nisk temp przyłacz primerów 35C. Druga 30 cykli już w 55C Winiki nie powtazalne. Wywołac jak PCR wiele szczepów rózniących się prązkami. W praktyce nap do poszukiwania S aureus z MRSA. PFGE-elektroforeza w zmiennym polu elektrycznym w 12C- precyzyjna charakterystyka szczepów. Wykozystujemy minimalne róznice w miejscach restrykcyjnych. Trawienie enzymami rzadkotnącymi. Bakterie trawimy lizozynem i proteiną k w blokuagarozowym Alaniza tylko DNA chromosomalny.
PCR
- Zaloguj się lub zarejestruj by odpowiadać